Analyse der genomischen Struktur des humanen GRAF Gens ( GTPase Regulator Associated with FAK) bei Patienten mit Akuter Myeloischer Leukämie ( AML)

Abstract

In dieser Promotionsarbeit wurde die Struktur des humanen GRAF Gens auf 5q31 untersucht. Es konnte gezeigt werden, dass es aus 24 Exons besteht, die Exonlänge variiert zwischen 37 und 967 bp. cDNA und Proteinstruktur von 14 Klonen von 10 Patienten, die an AML erkrankt sind, wurden mit dem GRAF Wildtyp verglichen. Bei 13 der 14 Klone konnten Deletionen nachgewiesen werden, bei 7 Klonen wurde Intronsequenz in der cDNA gefunden. Durch Deletion und Insertion von Introsequenz waren bei den Patienten nur Bruchstücke des GRAF Proteins enthalten. In einem Yeast Two Hybrid Versuch konnte gezeigt werden, dass dadurch Funktion und Interaktionsfähigkeit der aberranten GRAF Proteine verloren geht. Für die Insertion von Intronsequenz in cDNA konnte auf genomischer Ebene keine Erklärung gefunden werden. In this thesis the structure of the human GRAF gene on 5q31 was analyzed. It could be shown that it consists of 24 exons, the exon length varies between 37 und 967 bp. cDNA and protein structure of 14 clones from 10 patients suffering from AML were compared with GRAF wildtype. In 13 of 14 clones deletions were found, in 7 clones intron sequences were found in cDNA. Due to the deletions and insertion of intron sequences only parts of the GRAF protein were contained. In a yeast two hybrid assay it could be prooved that protein function and interaction of the mutant GRAF proteins are impaired. The insertion of intron sequences in cDNA did not take place because of a mutation in the genomic DNA.