Differenzierungsverhalten immortalisierter humaner gingivaler Keratinozyten

Abstract

Ziel dieser in vitro Studie war, das Differenzierungsverhalten immortalisierter und primärer gingivaler Keratinozyten in Bezug auf die Expression intrazellulärer Marker zu untersuchen. Die immortalisierten Zellen entstammten einer klonalen Zelllinie gingivaler Keratinozyten, die mit einem viralen Plasmid transfiziert wurden. Die primären Zellen wurden aus Biopsaten isoliert, in Zellkulturflaschen inkubiert und vermehrt. Die Differenzierung wurde durch Ca2+, Mg2+ und FCS-haltiges Nährmedium eingeleitet. Über ein Zeitraum von zwölf Tagen wurden die Zellen inkubiert und im undifferenzierten Zustand und nach 1, 3, 6, 9 und 12 Tagen Proben fixiert und eingefroren. Im Durchflusszytometer wurden die Zellen auf die Expression von Zytokeratinen und apoptotischen Markern untersucht. Darüber hinaus wurden immortalisierte humane gingivale Keratinozyten auf Zellkultureinsätzen ausgesät und die Ausbildung des transepithelialen elektrischen Widerstandes (TER) bestimmt.Die Expression der untersuchten Proteine ließ den Schluss zu, dass es sich bei den untersuchten Zellen um gering differenzierte Keratinozyten handelt. Eine deutliche Veränderung der Expressionsstärke mit Zunahme der Differenzierungsdauer war nicht zu beobachten. Es wurden keine grundlegenden Unterschiede im Expressionsverhalten zwischen immortalisierten und primären, gingivalen Keratinozyten festgestellt. Die auf Zellkultureinsätzen untersuchten Zellen zeigten eine deutliche Zunahme des TER und damit das Bild einer beginnenden Differenzierung. The aim of the current in vitro study was to investigate the differentiation of immortalized and primary gingival keratinocytes by analysis of the expression of intracellular markers. Human gingival keratinocytes obtained by oral surgery procedures and immortalised human gingival keratinocytes, were used. The cells were cultured in cellculture flasks and differentiated over 12 days using a culture medium containing Ca2+, Mg2+ and fetal calf serum. At different stages the cells were collected and frozen: undifferentiated and after 1, 3, 6, 9 and 12 days of differentiation. The pattern of cytokeratines and apoptotic markers was investigated using flow cytometry. Moreover, immortalised human gingival keratinocytes were seeded on cell inserts and the establishment of transepithelial electrical resistance (TER) was observed.In conclusion, the expression of proteins suggests a marginal differentiation of the analysed keratinocytes. There were no essential differences between immortalised and primary human gingival keratinocytes. The cells grown on cell inserts showed a clear increase of TER, correlating with the initiation of differentiation.