Identifizierung von fünf Tegumentproteinen (UL37, UL46, UL47, UL48, UL49) sowie von zwei Nichtstrukturproteinen (UL31, gG) des Virus der infektiösen Laryngotracheitis der Hühner und Evaluierung einer UL47-Deletionsmutante als potentielle Lebendvirus-Vakzine
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Zusammenfassung
In der vorliegenden Arbeit wurden die ILTV-Homologen von sieben konservierten alphaherpesviralen Genen untersucht. Durch Northern Blot-Analysen wurden die viralen mRNAs identifiziert und deren Expressionskinetik in infizierten Zellen bestimmt. Mit Hilfe monospezifischer Antiseren, die nach Immunisierung von Kaninchen mit bakteriellen Fusionsproteinen erhalten wurden, konnten die entsprechenden viralen Proteine nachgewiesen werden. Diese zeigten in Western Blot-Analysen apparente Massen von 33,4 kDa (UL31), 112 kDa (UL37), 64,2 kDa (UL46), 65,6 kDa (UL47), 44,8 kDa (UL48), 33,5 kDa (UL49) und 52,3-70,7 kDa (US4). Die Massen der UL31-, UL37- UL48- und UL49-Genprodukte entsprachen den Erwartungen. Die UL46-, UL47- und US4-Proteine hingegen waren gegenüber den in vitro-Translationsprodukten deutlich vergrößert, was auf posttranslationale Modifikationen hinwies. Studien mit Hemmstoffen und Glykosidasen ergaben, dass das US4-Genprodukt von ILTV N-glykosyliert ist und deshalb wie seine Homologen als gG bezeichnet werden kann. Wie einige der homologen Glykoproteine wird das gG von ILTV von infizierten Zellen sezerniert, aber nicht in Virionen eingebaut. Auch das UL31-Genprodukt ist offensichtlich ein Nichtstrukturprotein, während die UL37-, UL46-, UL47-, UL48- und UL49-Genprodukte wie die entsprechenden Tegumentproteine anderer Herpesviren in reifen ILTV-Partikeln nachweisbar waren. Durch indirekte Immunfluoreszenztests konnte gezeigt werden, dass die Genprodukte von UL31 und UL48 vor allem im Kern, die von UL37, UL46, UL47, UL49 und US4 überwiegend im Zytoplasma infizierter Zellen lokalisiert sind. Darüber hinaus wurde nachgewiesen, dass die Kernlokalisation des UL48-Proteins mit einer transaktivierenden Wirkung auf die virale immediate-early-Genexpression korreliert. In zahlreichen Versuchen gelang es nicht, UL31-, UL37-, UL46-, UL48- oder UL49-negative ILTV-Rekombinanten zu isolieren, was auf wichtige Funktionen dieser Gene hindeutete. Dagegen konnte durch die Herstellung von UL47- und US4-Deletionsmutanten gezeigt werden, dass die entsprechenden Proteine für die Virusreplikation in Zellkultur entbehrlich sind. Während die Deletion des gG-Gens US4 keine erkennbaren Auswirkungen hatte, war die Replikation von UL47-negativem ILTV deutlich verlangsamt, und die maximalen Virustiter waren gegenüber dem Wildtypvirus und einer UL47-Revertante etwa zehnfach reduziert. Durch einen Tierversuch konnte gezeigt werden, dass ILTV-deltaUL47 auch in vivo attenuiert ist und dass mit dieser Rekombinante immunisierte Hühner gegen eine Belastungsinfektion mit pathogenem Wildtypvirus geschützt sind. Die hergestellte Mutante könnte deshalb als Lebendvirus-Vakzine zur Bekämpfung der ILT geeignet sein.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler 2006