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Neue Veröffentlichungen:

Development of SNAP tag and horseradish peroxidase-based nanobodies as secondary antibody mimics for indirect immunoassays
(2025) Sheng, Wenjie
Immunoassays are widely used in diagnosis and biomedical research for the detecting and quantifying specific biomolecules. Based on antigen-antibody interaction system, immunoassays enable the localization, qualitative analysis and quantification of target proteins. Among these, indirect immunoassays offer enhanced signal amplification and flexibility by using fluorescence-conjugated secondary antibodies. However, conventional secondary antibodies, predominantly immunoglobulin (IgG), present challenges due to their large size (150 kDa). Moreover, most animal-derived antibodies raise ethical concerns and exhibit batch-to batch variability. In contrast, small antibody fragments such as nanobodies (Nbs), which are derived from camelids and consist of only a single variable domain, are significantly smaller size (15 kDa) and can be efficiently produced using mammalian cell expression system. In this study, five previously established anti-mouse and anti-rabbit IgG secondary Nbs were selected and incorporated with a self-labeling SNAP-tag. The SNAP-tag (20 kDa) catalyzes the covalent, site-specific attachment of O6-benzylguanine (BG)-modified fluorophores to recombinant Nbs anti-IgG-SNAP proteins. These Nbs anti-IgG-SNAP were expressed in HEK293T cells. Following a rapid and straightforward conjugation protocol involving the SNAP-tag and BG modified Alexa Fluor dyes, the specific detection capability of Nbs anti-IgG-SNAP for mouse- or rabbit-derived primary antibodies was validated using flow cytometry and multi-color fluorescence microscopy. Additionally, these secondary nanobodies were further developed to be combined with horseradish peroxidase (HRP) and the recombinant Nbs anti-IgG-HRP proteins were expressed in HEK293T cells. Their functionality was validated as secondary antibodies in Western blot (WB) and tyramide signal amplification (TSA)-based multiplex immunofluorescence (mIF) assays. The results demonstrated that Nbs anti-IgG-SNAP and Nbs anti-IgG-HRP specifically bound to mouse or rabbit antibodies, exhibiting fluorescence intensities, quantitative validity and specificity comparable to conventional anti-mouse or anti-rabbit secondary antibodies. Moreover, their cost-effectiveness, scalable expression, easy of purification and simple site-specific conjugation procedures present an innovation alternative to traditional animal-derived antibody production, ensuring greater standardization and reproducibility in research applications. Taking together, these findings suggest that recombinant anti-mouse and anti-rabbit IgG secondary nanobodies present a promising and reliable alternative to traditional secondary antibodies in various indirect immunoassays.
Experimental Data for 'Ozonido- and Oxido-TMC Complexes of Iron and Cobalt'
(2026) Gerbig, Dennis; Schaub, Stefan
Analytical data to accompany 'Ozonido- and Oxido-TMC Complexes of Iron and Cobalt' by Schaub et al. Iron and cobalt complexes of tetramethylcyclam and D12-tetramethylcyclam were ozonized at low temperature and the samples subjected to analysis by cold electrospray mass spectrometry (cold ESI-MS; measured on a UHR-TOF Bruker Daltonik maXis plus instrument) and ultraviolet-visible spectroscopy (UV-Vis; measured on a Jasco V-760 instrument). Data is presented as x,y pairs of values in ASCII encoding and in CSV format. Additional experimental metadata is provided for each data subset in file readme.txt. All files can be read by any standard text or stream editor and imported into spreadsheet or plotting software for visualization. Dataset contents: - coldESIMS.zip (cold ESI-MS data) - UVVis.zip (UV-Vis data)
tRNA-Mimikry in Mengoviren: virale RNA-Elemente, welche die Glycyl-tRNA-Synthetase binden
(2025) Droß, Fabian
Picornaviren sind kleine RNA-Viren, welche aus einer positiven einzelsträngigen RNA bestehen. Diese (+)ssRNA codiert das gesamte virale Polyprotein. Der codierende Bereich des Polyproteins ist am 5´- und 3´-Ende von untranslatierten Regionen (UTRs) mit komplexer Sekundärstruktur flankiert. Die virale RNA ist am 5´-Ende anstatt mit einem Cap-Nukleotid mit einem viralen Protein (VPg) versehen, das 3´-Ende endet mit einem Poly(A)-Schwanz. Aufgrund der fehlenden 5´-Cap-Struktur wird die virale Translation über eine "internal ribosome entry site" (IRES) in der 5´-UTR initiiert. Der Zusammenbau des Ribosoms an der viralen RNA findet mithilfe von Teilen des humanen 48S-Inititationskomplexes, eukaryotischen Initiationsfaktoren (eIFs) und weiteren Proteinen, die an die virale IRES binden, statt. Diese IRES bindenden Proteine werden als IRES trans acting factors (ITAFs) bezeichnet. Zu den ITAFs gehören Proteine wie PTB, hnRNP K, UNRIP und PCBP 1 und 2. Auch für die Glycyl-tRNA Synthetase (GARS) konnte bereits eine Funktion als ITAF in Polioviren gezeigt werden. Hier bindet GARS an die Domäne V der 5´-UTR. Es erkennt die tRNA ähnliche Struktur der UTR und bindet an eine (einzelsträngige) 5´-CCA-3´ Sequenz eines Loops. Diese Bindung wird aber nicht nur in Enteroviren vermutet. Aufgrund der Bedingungen der Bindung von GARS an die virale RNA finden sich viele weitere theoretische GARS-Bindestellen (GBE) in den verschiedenen Picornaviren, so auch im Mengovirus (MV), einem Isolat des Encephalomyocarditis Virus (EMCV) aus der Gruppe der Cardioviren. Das Mengovirus stammt aus der Region Mengo in Uganda und infiziert in erster Linie Nager und nicht-humane Primaten, in welchen es dann eine schwere Myokarditis auslöst, aber auch der Mensch kann infiziert werden. In dieser Arbeit wurden die gefundenen GBEs in der MV 5´- und 3´-UTR untersucht. Hierfür wurden Reporter-RNAs mit Mutationen der beiden UTRs in HeLa Zellen transfiziert. Durch Optimierung der verwendeten Pull-Down-Methode konnte die Bindung von GARS an die MV RNA nachgewiesen werden. Mittels Massenspektrometrie wurde die Auswirkung der GARS-Bindung untersucht. Hierbei wurde beobachtet, dass durch die Bindung von GARS die Bindung einer Vielzahl weiterer Proteine gefördert wird. Diese Proteine gehören unter anderem zu den Translationis-Initiationsfaktoren, Elongationsfaktoren oder zu Teilen der ribosomalen Untereinheiten. Es konnte die Bindung von GARS an die virale RNA nachgewiesen werden, und die daraus folgende positive Wirkung wird in dieser Arbeit diskutiert.
Between (contested) worlds: An autoethnography of interdisciplinary research and teaching collaborations at the interface of sociology and veterinary medicine
(2026-01-25) Ameli, Katharina; Krämer, Stephanie
Interdisciplinary collaborations have become a relevant core variable in the analysis of complex issues in science. Shared research processes are also known as multidisciplinarity, crossdisciplinarity, and transdisciplinarity, which are all closely related to interdisciplinarity. This article traces the meanings, challenges, and benefits of interdisciplinarity on the basis of a lived interdisciplinary collaboration at the interface between sociology and veterinary medicine. An autoethnography of the authors’ interdisciplinary work is presented to highlight the challenges and limits of this practice.
Analyse der Replikationsfähigkeit des Mengovirus in Abhängigkeit von Mutationen der Glycyl-transfer-Ribonukleinsäure-Synthetase-Bindestelle in der 3‘-nicht-translatierten-Region
(2025) Fuchshuber, Selena A.
Das Mengovirus (MV) gehört zur Familie der Picornaviridae und zur Gattung der Cardioviren. Das RNA-Genom umfasst 7,8 kb, ist positiv-orientiert und einzelsträngig. Das Leseraster für das Polyprotein wird flankiert von den 5‘- und 3‘-untranslatierten Regionen (UTRs). In der 5‘-UTR lieg t eine interne Ribosomeneintrittsstelle (IRES), mit deren Hilfe das Virus-Genom cap-unabhängig im Wirtszytosol in ein Polyprotein translatiert werden kann. Die 3‘-UTR enthält drei Stemloops (SLs), wobei in SL I ein konserviertes Signal liegt, das bereits beim Poliovirus gefunden wurde und dort Einfluss auf den viralen Replikationszyklus hat. Das Poliovirus, das ebenfalls zur Familie der Picornaviridae zählt, besitzt dieses konservierte Signal in der 5‘-UTR. Die Glycyl-tRNA-Synthetase (GARS), die normalerweise in der Proteinbiosynthese die Bindung der Aminosäure Glycin an die zugehörige transfer-Ribonukleinsäure (tRNA) katalysiert, kann an dieser Stelle spezifisch an die Poliovirus-RNA binden und scheint so deren Translation zu fördern im Sinne einer nicht-enzymatischen Funktion. In der vorliegenden Arbeit wurde aufgrund dieser Beobachtung die GARS als möglicher Interaktionspartner des MV analysiert. Hierfür wurde an der Stelle des konservierten GARS-Signals im MV eine Mutation eingefügt, sodass eine mögliche Bindung der GARS verhindert werden würde. Dabei zeigte sich, dass die GARS-Bindung an die 3‘-UTR des MV einen positiven Einfluss auf die Virusproduktion hat. Es konnte in der vorliegenden Arbeit allerdings nicht eindeutig geklärt werden, ob diese Beobachtung auf die Replikation, die Translation oder die Stabilität der RNA zurückzuführen ist. Weiterhin wurde die Virusproduktion in verschieden Zelllinien (HeLa-Zellen, humane neuronale Zellen (SK-N-AS), sowie Neuroblasten aus der Hausmaus (Neuro-2A)) untersucht, da das MV vor allem neuropathogen für Nagetiere zu sein scheint. Hier wurde deutlich, dass das MV stärker in neuronalen Zellen der Maus repliziert als in humanen Zellen.