In der vorliegenden Arbeit sollten die für die Rezeptorbindung verantwortlichen, die C-terminalen 280 Aminosäuren umfassenden Fragmente der Intimine beta und gamma von STEC auf ihr Bindungsvermögen an bovine Lymphozyten hin untersucht werden. Zu diesem Zweck wurden die Fragmente als Fusionsproteine mit Maltose-bindendem Protein (MBP) rekombinant hergestellt und affinitätschromatographisch gereinigt. Über durchflusszytometrische und fluoreszenzmikroskopische Bindungsstudien hinaus wurden funktionelle Untersuchungen mit mitogen-stimulierten Lymphozyten durchgeführt. Dazu wurde das Proliferationsverhalten während der Inkubation der Zellen in Anwesenheit und Abwesenheit der Intimin-Fragmente durchflusszytometrisch untersucht. Die reverse Realtime-PCR diente zur Quantifizierung der Transkription ausgewählter Zytokine der TH1- und TH2-Immunreaktion. Um die Bedeutung der gewonnenen Erkenntnisse für die mukosale Immunantwort beurteilen zu können, wurden die Untersuchungen sowohl mit peripheren (PBMC) als auch mit intraepithelialen Lymphozyten aus dem Ileum (iIEL) durchgeführt.
Vergleichsexperimente bestätigten, dass die gewonnenen Fusionsproteine in der Lage waren an HeLa-Zellen zu binden. Selbst unter Verwendung verschiedener Nachweissysteme konnte eine Bindung der Intiminfragmente an bovine PBMC oder iIEL jedoch nicht nachgewiesen werden. Das Fehlen von Intiminrezeptoren auf bovinen Lymphozyten wurde auch durch die funktionellen Untersuchungen bestätigt. So beeinflussten die Intiminfragmente weder die Proliferation mitogen-stimulierter PBMC noch die Transkription der untersuchten Zytokin-Gene.Diese Ergebnisse unterstützen die Hypothese, dass bovine Lymphozyten gegenüber einer kostimulatorischen Aktivität von Intiminen anerg sind. Dies stellt einen weiteren Schritt zum Verständnis der molekularen Mechanismen dar, mit denen STEC die Darmschleimhaut von Rindern persistent kolonisieren können.
Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
