Evaluation der Hämatologiesysteme Sysmex pocH-100iV Diff und XT-2000iV für die Tierart Katze

Abstract

Ziel der vorliegenden Studie ist die Evaluation des Sysmex XT-2000iV, einemGroßlaborgerät und des Sysmex pocH-100iV Diff, einem Hämatologiesystem für dieAnwendung in der Praxis.Material und MethodenZur Untersuchung werden EDTA-antikoagulierte Blutproben von 208 Katzen, dieinnerhalb von vier bis sechs Stunden verarbeitet werden, herangezogen. AlsVergleichsmethode dienen der ADVIA 2120, der Zentrifugenhämatokrit und einemanuelle Differenzierung von 200 Leukozyten. Ein Blutausstrich zurRetikulozytenzählung (Zählung von insgesamt 1000 Erythrozyten) dient als Vergleichzur gemessenen Retikulozytenzahl. Zusätzlich erfolgen eine Bestimmung derLinearität und Verschleppung, ein Antikoagulanzvergleich sowie einBlutlagerungsversuch über 72 Stunden mit gekühlten und ungekühlten Blutproben.Für alle drei Geräte wird eine Präzisionsmessung innerhalb einer Serie zurBerechnung der Standardabweichung und des Variationskoeffizienten durchgeführt.Die lineare Regression, der Spearman Korrelationskoeffizient rs, die Passing-BablokRegression sowie die Bland-Altman Analyse (errechnet mittels Microsoft Excel Analyse-it (Version 2.04)) dienen zur statistischen Auswertung desMethodenvergleichs.ErgebnisseDie Bestimmung der Präzision ergibt bezüglich des Variationskoeffizienten derBlutzellzählung sehr gute bis gute Werte zwischen 0,31% und 7,62%. Der schlechteVariationskoeffizient (118,62%) der Thrombozytenzählung des pocH-100iV Diff istdaher auffällig, muss jedoch im Zusammenhang mit der bekannten Problematik einerLimitation der Impedanztechnologie zur Bestimmung von Katzenthrombozytengewertet werden. Betrachtet man die Blutzelldifferenzierung, liegen dieVaiationskoeffizienten zwischen 1,18% und 13,05%. Der Linearitätsversuch ergibtzufrieden stellende Ergebnisse.Im Methodenvergleich XT-2000iV mit ADVIA 2120 der Parameter WBC, RBC, HGB,HCT, MCH, MCHC, MCV, PLT werden Spearman-Korrelationskoeffizienten zwischen1 und 0,37 erreicht. Die Mittelwertunterschiede betragen 0,18x 109/l für WBC, 0,46x1012/l für RBC, -1,72 mmol/l für HGB, 0,00 l/l für HCT, -0,26 fmol/l für MCH, -7,25mmol/l für MCHC, 2,58fl für MCV, 3,8x 109/l für PLT. Bezüglich der Thrombozyten isttrotz niedrigem Mittelwertunterschied eine weite Streuung der 95%igenÜbereinstimmungsgrenze auffällig. Betrachtet man die slope Werte, fallenproportionale Fehler im Vergleich von RBC, HGB, HCT, MCH, MCV und PLT auf.Im Vergleich pocH-100iV Diff mit ADVIA 2120 der Parameter WBC, RBC, HGB, HCT,MCH, MCHC, MCV, PLT liegen die Spearman-Korrelationskoeffizienten zwischen0,96 und 0,32. Es werden folgende Mittelwertunterschiede erzielt: 0,71x 109/l fürWBC, 0,30 x 1012/l für RBC, -1,81 mmol/l für HGB, 0,00 l/l für HCT, -0,25 fmol/l fürMCH, -6,62 mmol/l für MCHC, 1,53 fl für MCV, 48,0 109/l für PLT. Hinzu kommt eineweite Streuung der 95%igen Übereinstimmungsgrenze der PLT. Proportionale Fehlersind hier bei RBC, HGB und dessen Indizes sowie PLT auffällig.Betrachtet man die Ergebnisse der Differentialblutbilder sind im manuellen Vergleichfür die Geräte XT-2000iV, pocH-100iV Diff und ADVIA 2120 Spearman-Korrelationskoeffizienten zwischen 0,92 und 0,44, sowie Mittelwertunterschiede von-4,34 bis-3,88% für neutrophile Granulozyten, 1,67 bis 5,68% für Lymphozyten, 0,74bis 2,74% für Monozyten, 0,05 bis 0,89% für eosinophile Granulozyten und -6,15 fürOTHR ermittelt worden.Die Retikulozytenzählungen des XT-2000iV fallen im Vergleich zum ADVIA 2120 undzur manuellen Methode höher aus.Im Antikoagulanzienvergleich besteht ein signifikanter Unterschied in der MCHC-(EDTA und Heparin) Lymphozyten- (EDTA, Heparin und Citrat) undMonozytenzählung (EDTA und Heparin) beim XT-2000iV und des MCV (EDTA,Heparin und Citrat) beim pocH-100iV Diff.In Betrachtung der Lagerungszeit und -temperatur erweisen sich WBC, RBC, HGB,MCH stabil. HCT, MCV und MCHC werden durch eine Anschwellung derErythrozyten beeinflusst. Die Thrombozytenzahl ist instabil und steigt bereits nacheiner dreistündigen Lagerungszeit an. Die bei 4°C gelagerten Blutproben stellen sichim Allgemeinen stabiler dar.SchlussfolgerungIm Gesamtbild stellen sich die Hämatologiesysteme als geeignet für denRoutinebetrieb dar. Die Abweichungen der Hämoglobinwerte und dessen Indizessind auf Grund eines proportionalen Fehlers des ADVIA 2120 zu begründen.Möglicher Weise sind die proportionalen Fehler der RBC, des HCT und des MCVFolge der technologischen Unterschiede der Geräte. Eine tierartspezifischeSoftwareadaptation ist somit notwendig und bereits erfolgt. DieThrombozytenzählung stellt auf Grund der Aggregationsneigung bei der Katze einpräanalytisches Problem dar, so dass weiterhin bei klinisch entscheidenden Wertenstets eine Schätzung und Verifizierung mittels Blutausstrich bei Katzen durchgeführtwerden sollte.Zur Auswertung des Differentialblutbildes sollte beim XT-2000iV das Scattergrammhinzugezogen werden. Dies sollte als Hilfestellung zur Erkennung vonpathologischen Blutproben verwendet werden. Letztendlich ist eine Verifizierungmittels Blutausstrich unumgänglich. Die Aussage des Differentialblutbildes bei einemImpedanzgerät (pocH-100iV Diff) ist in Frage zu stellen und bedarf ebenfalls einermanuellen Verifizierung.Eine Retikulozytenanalyse ist hinsichtlich der Anämieklassifikation von Vorteil. AufGrund der unterschiedlichen Ergebnisse bezüglich der manuellen Methode und desADVIA 2120/120 sind weitere Studien zur Bestimmung von gerätespezifischen Cutoff-Werten erforderlich.Der XT-2000iV stellt sich als Einsendegerät geeignet dar. Insgesamt sollten dieProben kühl gelagert und die Messung sollte 36 Stunden nach der Blutentnahmeabgeschlossen sein. Für die Hämatokrit- und Thrombozytenbestimmungen sindfrühere Analysen erforderlich. The aim of this study is the evaluation of the laboratory instrument Sysmex XT-2000iV and the instrument pocH-100iV Diff for in-clinic use.Material and methods208 EDTA-anticoagulated blood samples of cats are measured within four to sixhours after blood withdrawal. For comparative studies the ADVIA 2120, the spun-PCV, and a 200-cell manual differential is used. Reticulocytes are compared with a1000-cell manual count. Additionally linearity, carry over, anticoagulation effects, andstorage effect over 72 hours with samples stored at 4°C and 22°C are evaluated.A precision study is used for calculation of standard deviation and coefficient ofvariation.Linear regression, Spearmans correlation coefficient, Passing-Bablok regressionand Bland-Altman analysis (calculated with Microsoft Excel Analyse-it (Version2.04)) are used for statistical evaluation of method comparison.ResultsThe coefficient of variation (CV) of the precision studies range between 0.31 % and7.62%. The CV of the platelet count of the pocH-100iV Diff was 118.62 %. CV´s inleukocyte differential count range between 1.18 % and 13.05 %.The results of the linearity experiment are good.In method comparison of the XT-2000iV with the ADVIA 2120 the Spearmancorrelation coefficients range between 1 and 0.37 for WBC, RBC, HGB, HCT, MCH,MCHC, MCV, and PLT. Biases are 0.18x 109/l for WBC, 0.46x 1012/l for RBC, -1.72mmol/l for HGB, 0.00 l/l for HCT, -0.26 fmol/l for MCH, -7.25 mmol/l for MCHC, 2.58flfor MCV, and 3.8x 109/l for PLT. In spite of the low bias the range of the 95% limits ofagreement for PLT is high. Proportional errors are noticeable for RBC, HGB, MCH,MCV, and PLT.In comparison of the pocH-100iV Diff with the ADVIA 2120 Spearman correlationcoefficients for WBC, RBC, HGB, HCT, MCH, MCHC, MCV, and PLT range between0,96 and 0,32. Biases are 0.71x 109/l for WBC, 0.30 x 1012/l for RBC, -1.81 mmol/l forHGB, 0.00 l/l for HCT, -0.25 fmol/l for MCH, -6.62 mmol/l for MCHC, 1.53 fl for MCV,and 48.0 109/l for PLT. Additionally a high range of the 95% limits of agreements forPLT and proportional errors for RBC, HGB, its indices, and PLT are noticed.Regarding the results of differential count for XT-2000iV, pocH-100iV Diff and ADVIA2120 in comparison with manual differential the Spearman correlations coefficientsrange between 0.92 and 0.44 and the biases range between -4.34 and -3.88% forneutrophil granulocytes, between 1.67 and 5.68% for lymphocytes, between 0.74 and2.74% for monocytes, between 0.05 and 0.89% for eosinophil granulocytes, and-6.15 for OTHR.A positive proportional bias for reticulocyte counting for the XT-2000iV compared withADVIA 2120/120 and the manual method is observed.Comparing anticoagulants, a significant difference is detected for MCHC (EDTA andHeparin) lymphocytes (EDTA, Heparin and Citrate) and monocytes (EDTA andHeparin) (XT-2000iV) and for MCV (EDTA, Heparin and Citrate) (pocH-100iV Diff).Regarding time and temperature of storage WBC, RBC, HGB, and MCH are stable.HCT, MCV and MCHC are influenced by erythrocyte swelling. Thrombocyte countsare unstable and are already rising after 3 hours of storage. More stable results arereceived by storage at 4°C.ConclusionIn general the evaluated instruments are adequate for laboratory and in-clinic use.The proportional biases for HGB, MCH, and MCHC are caused by the measurementswith the ADVIA 2120 as shown in other studies. Proportional biases of RBC, HCT,and MCV are possibly the result of different technologies of the instruments whichmake a software-adaptation for each different species essential. A new and speciesspecific software adaptation is necessary and was therefore already created. Theresults for PLT-counts are not sufficiently accurate for both instruments, but this erroris classified as a preanalytic error as a result of frequent platelet aggregation in cats.Verification using a blood smear is recommended in feline blood samples for clinicallyimportant values.Leukocyte differential values should be interpreted with caution. Additionalscattergramm and blood smear interpretation is essential.Reticulocyte analysis is very useful in classification of anemic patients. Because ofthe positive proportional bias further studies are recommended for evaluation of aninstrument specific cut-off value.Regarding the variability of results during storage, measurements should be finishedwithin 36 hours after blood sampling. For HCT and PLT analysis faster termination isrequired.