Etablierung eines revers genetischen Systems für feline Coronaviren
| dc.contributor.author | Tekes, Gergely | |
| dc.date.accessioned | 2023-03-08T17:41:26Z | |
| dc.date.available | 2008-07-31T11:06:28Z | |
| dc.date.available | 2023-03-08T17:41:26Z | |
| dc.date.issued | 2008 | |
| dc.identifier.isbn | 978-3-8359-5325-3 | |
| dc.identifier.uri | http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hebis:26-opus-60942 | |
| dc.identifier.uri | https://jlupub.ub.uni-giessen.de//handle/jlupub/12894 | |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.22029/jlupub-12277 | |
| dc.description.abstract | Im Rahmen dieser Arbeit erfolgte die Etablierung eines revers-genetischen Systems für ein Serotyp I felines Coronavirus (FCoV). Dabei wurden folgende Ergebnisse erzielt: 1) Als Grundlage für die Etablierung des Systems wurde die komplette Genomsequenzdes FCoV Stammes Black bestimmt und anhand dieser Sequenz der Genomaufbauermittelt. Es ließ sich der für Coronaviren typische Genomaufbau nachweisen. 2) Die Herstellung eines infektiösen Klons beinhaltete die Integration einer komplettencDNA Kopie des FCoV Stammes Black in das Vaccinia Virus Genom, welches alsVektor diente. Die coronavirale cDNA wurde in vitro transkribiert und die synthetischeRNA in Zellen elektroporiert. Rekombinante FCoV ließen sich nachweisen und somitwar die synthetische RNA infektiös, also in der Lage, den coronaviralenReplikationszyklus zu initiieren und zu durchlaufen. Die Analyse der gewonnenenrekombinanten Viren erfolgte nach Infektion feliner Zellkulturen mit verschiedenenAnsätzen. Dabei konnte festgestellt werden, dass die rekombinanten Viren diegleichen Eigenschaften wie der ursprüngliche FCoV Stamm Black besitzen. 3) In nachfolgenden Versuchen erfolgte die Herstellung zweier ReportergenexprimierenderFCoV mit dem etablierten revers-genetischen System. Dabei wurdenim FCoV Stamm Black Genom die akzessorischen Gene 3abc durch das greenfluorescent protein (GFP) oder Renilla Luciferase ersetzt. Die stabile Expression derReportergene konnte in felinen Zellkulturen nachgewiesen werden. 4) Feline Monozyten, Makrophagen und dendritische Zellen (DCs), die als Zielzellensowohl von FCoV als auch von anderen Coronaviren gelten, wurden mit Wildtyp undden Reportergen-exprimierenden FCoV in vitro infiziert. Die Infektion vonmonozytären Zellen konnte ausschließlich mit Hilfe der GFP exprimierendenMutanten nachgewiesen werden. | de_DE |
| dc.description.abstract | In this study a reverse genetic system for a serotype I feline coronavirus was established.The following results were obtained: 1) As basis for the establishment of a reverse genetic system the complete genomicsequence of FCoV strain Black was determined. The sequence analysis revealed thetypical genome organization for coronavirus. 2) For the generation of an infectious clone the full-length FCoV strain Black cDNA wasintroduced into vaccinia virus as cloning vector. The FCoV cDNA was used for in vitrotranscription and the synthesized RNA electroporated into cells. Recombinant FCoVcould be detected which showed that the in vitro transcribed RNA was infectious andcould initiate the coronavirus replication cycle. The resulting recombinant virus wasanalyzed in feline cell culture using different approaches. It could be demonstratedthat the properties of the recombinant virus are indistinguishable from those of FCoVwild type virus strain Black. 3) In subsequent experiments based on the newly established reverse genetic system,two reporter gene expressing recombinant FCoV were generated. The accessorygenes 3abc were replaced by genes encoding the green fluorescent protein (GFP)and Renilla luciferase. The stable expression of these reporter genes wasdemonstrated in feline cell culture. 4) Feline monocytes, macrophages and dendritic cells (DCs) which are considered to beimportant target cells for FCoV and other coronaviruses were infected with thewildtype and the reporter gene expressing FCoV. The infection of the monocytic cellswas exclusively shown with the GFP expressing mutant. | en |
| dc.language.iso | de_DE | de_DE |
| dc.rights | In Copyright | * |
| dc.rights.uri | http://rightsstatements.org/page/InC/1.0/ | * |
| dc.subject.ddc | ddc:630 | de_DE |
| dc.title | Etablierung eines revers genetischen Systems für feline Coronaviren | de_DE |
| dc.type | doctoralThesis | de_DE |
| dcterms.dateAccepted | 2008-07-07 | |
| local.affiliation | FB 10 - Veterinärmedizin | de_DE |
| thesis.level | thesis.doctoral | de_DE |
| local.opus.id | 6094 | |
| local.opus.institute | Institut für Virologie | de_DE |
| local.opus.fachgebiet | Veterinärmedizin | de_DE |
| local.source.freetext | Giessen : VVB Laufersweiler 2008 | de_DE |
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