Vergleichende Untersuchungen von zwei phänotypischen und einem genotypischen Nachweisverfahren zur Detektion von ZNS-Risikogewebe in Fleisch und Fleischerzeugnissen
| dc.contributor.author | Göbel, Katrin-Annette | |
| dc.date.accessioned | 2023-03-08T17:43:04Z | |
| dc.date.available | 2010-04-09T06:03:33Z | |
| dc.date.available | 2023-03-08T17:43:04Z | |
| dc.date.issued | 2010 | |
| dc.identifier.isbn | 978-3-8359-5518-9 | |
| dc.identifier.uri | http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hebis:26-opus-75066 | |
| dc.identifier.uri | https://jlupub.ub.uni-giessen.de//handle/jlupub/13013 | |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.22029/jlupub-12396 | |
| dc.description.abstract | Vor dem Hintergrund der Übertragbarkeit des BSE-Erregers vom Rind aufden Menschen müssen gemeinschaftsweit spezifizierte Risikomaterialienvon Wiederkäuern aus der Nahrungsmittelkette entfernt, gekennzeichnetund unschädlich beseitigt werden. Dies wird durch die VO (EG) 999/2001festgelegt. Aufgrund ihrer besonders hohen Infektiösität kommt dembovinen Gehirn und Rückenmark innerhalb der spezifiziertenRisikomaterialien eine besondere Bedeutung zu. Um die Einhaltung dergesetzlichen Vorgaben überwachen und zusätzlich bereits präventivbetriebliche Eigenkontrollen durchführen zu können, wird einzuverlässiges, sensitives und anwenderfreundliches Verfahren zumNachweis von zentralem Nervengewebe (ZNS) in Fleisch undFleischerzeugnissen benötigt.Im Rahmen der hier vorgestellten Arbeit wurden drei Verfahren zumNachweis von ZNS-Gewebe in Fleisch und Fleischerzeugnissenmiteinander verglichen. Dabei handelte es sich um zwei ELISA-Verfahrenzum Nachweis von GFAP: den RIDASCREEN® Risk Material-Test von Rbiopharm(Darmstadt) und den Brainostic von ScheBo® (Gießen), sowieeine am Institut für Tierärztliche Nahrungsmittelkunde der UniversitätGießen entwickelte Reverse Transkriptase-Real Time-PCR. AlsUntersuchungsmaterial wurden unterschiedliche Fleischerzeugnisseartifizell mit Rinderhirn bzw. Rinder-Rückenmark in verschiedenenKonzentrationsstufen kontaminiert und vergleichend aufbereitet. Um denEinfluss unterschiedlicher Parameter auf die Stabilität der jeweiligenMarkersubstanz beobachten zu können, wurden sowohl nativesHackfleisch, tiefgefroren aufbewahrtes Hackfleisch wie auchunterschiedlich stark hitzebehandeltes Untersuchungsmaterial in denVergleich mit einbezogen. Das Untersuchungsmaterial wurde überentsprechend ausgewählte Lagerungsperioden wiederholt aufbereitet. DieLagerungszeiten reichten von 14 Tagen bei frischem Hackfleisch bis zu 24Monaten bei Vollkonserven.Insgesamt wurden jeweils 204 Hackfleischproben, 50 Vollkonserven, 50Dreiviertelkonserven und 64 Kesselkonserven vergleichend aufbereitet. Inden Untersuchungen des nicht hitzebehandelten Probenmaterials zeigtedas Reverse Transkriptase-Real Time-PCR-Verfahren die höhsteEmpfindlichkeit. Mit dem Brainostic -ELISA wurden in denUntersuchungen von mit Rinderhirn versetztem Hackfleisch vereinzeltefalsch-negative Ergebnisse beobachtet. Die mit Rinder-Rückenmarkversetzten Hackfleischproben konnten mit diesem Verfahren ausnahmslosnachgewiesen werden. Eine etwas geringere Empfindlichkeit zeigte sichbei dem RIDASCREEN® Risk Material 10/5-ELISA. Obwohl durch eineModifikation der Probenaufbereitung die Nachweisbarkeit mit diesemVerfahren verbessert werden konnte, blieb es doch in der Empfindlichkeithinter den anderen Verfahren zurück.Dieser deutliche Unterschied in der Sensitivität der verwendetenNachweisverfahren zeichnete sich in den Untersuchungen vonBrühwurstkonserven nur noch tendentiell ab und war nicht statistischsignifikant.Die Ergebnisse der Untersuchungen von Leberwurst-Kesselkonservendeuteten darauf hin, dass die Beschaffenheit dieses Referenzmaterialseinen erheblichen Einfluss auf die Empfindlichkeit der Nachweisverfahrenausübte. Hier lag die Empfindlichkeit beider ELISA-Verfahren über der desmolekularbiologischen Verfahrens.Die Analysen zur Stabilität der Markersubstanzen GFAP-mRNA undGFAP-Protein stehen in guter Übereinstimmung zur aktuellenwissenschaftlichen Literatur. Es konnte gezeigt werden, dassinsbesondere die GFAP-mRNA einen in hohem Maß spezifischen undstabilen Marker zum Nachweis von ZNS-Gewebe darstellt.Die zusätzlichen Untersuchungen von Feldproben belegte dasVorhandensein von schlachttechnologisch bedingter ZNS-Kontaminationan Rinderköpfen und Rinderschlachttierkörpern. | de_DE |
| dc.description.abstract | Bovine spongiforme encephalopathy was diagnosed in Great Britain in1986 for the first time. The new variant of Creutzfeldt-Jakob-Disease wasdescribed in 1995 first. Today it is unquestioned that BSE can betransmitted from cattle to humans via oral intake of the infectious agent(prions). Several lines of evidence have shown that BSE-agent can betransmitted to humans via food chain, leading to the new variant CJD.Especally bovine brain and spinal cord are highly infectious because theyare preferred targets for BSE-agent. Against this background Europeanlegislation prohibited specified risk material (offals, SBO) from food chain.It is necessary to determine a reliable detection methode for CNS-tissue tocontrol the ban of SBO in food and to offer an instrument for selfcontrol tofood manufacturers. In this study three different methodes for the detectionof CNS-tissue in meat and meat products were compared:RIDASCREEN® Risk Material-ELISA (R-biopharm, Darmstadt),Brainostic -ELISA (ScheBo®, Gießen) and a Reverse Transcriptase-RealTime-PCR (Institute of Food Science, University Gießen). Both ELISAsystemsare based on detection of GFAP while the ReverseTranscriptase-Real Time-PCR uses a robust sequence region of GFAPmRNAas CNS-specific marker.As reference material different types of meat products were spiked withbovine brain or spinal cord in various concentrations. The studys aimed tomeasure the influence of various parameters, like storing period, heattreatment or composition to the stability of GFAP respectively GFAPmRNA.The analyses included minced meat, deep-frozen minced meatand heat treated canned meat productes. Each reference material wasanalysed over a determined periode: minced meat was stored for 14 dayswhile canned meat products were stored for up to 24 month. A total of 204samples of minced meat, 50 samples of canned meat products with Fvalue> 5, 50 canned meat products with F-value 0,84 and 56 cannedmeat products with F-value 0,48 were analysed with each detectionmethod. Reverse Transcriptase-Real Time-PCR showed to be the mostsensitive detection methode for analysing not heat treated reference143material. In analysis of not heat treated reference material containingbovine brain with the Brainostic -ELISA some false-negative results werefound, even if this detection methode was abel to detect all samplesspiked with bovine spinal cord. The RIDASCREEN® Risk Material 10/5-ELISA showed a lower sensitivity, although a modification in sample takingimproved the sensitivety of this test. No false-positive results wereobserved with either test using the manufactures´analytical protocols.Significant differences in sensitivety were not found in analysis of boiledsausages. Results of analysing canned liver sausage pointed out that thisfatty and enzyme-rich matrix had a massive influence on sensitivety of thebiomolecular test system. Although this reference material was only heattreated at low temperatures, it was difficult to detect small amounts ofCNS-tissue with the Reverse Transcription-Real Time-PCR. Both ELISAsystemsdid not have a loss of sensitivety in this matrix.This study showed that GFAP-mRNA as well as GFAP are highly specificand stable marker substances for detection of CNS-tissue and all threedetection methods were useful for routine diagnostic of CNS-tissue inmeat and meat products. | en |
| dc.language.iso | de_DE | de_DE |
| dc.rights | In Copyright | * |
| dc.rights.uri | http://rightsstatements.org/page/InC/1.0/ | * |
| dc.subject.ddc | ddc:630 | de_DE |
| dc.title | Vergleichende Untersuchungen von zwei phänotypischen und einem genotypischen Nachweisverfahren zur Detektion von ZNS-Risikogewebe in Fleisch und Fleischerzeugnissen | de_DE |
| dc.type | doctoralThesis | de_DE |
| dcterms.dateAccepted | 2010-02-10 | |
| local.affiliation | FB 10 - Veterinärmedizin | de_DE |
| thesis.level | thesis.doctoral | de_DE |
| local.opus.id | 7506 | |
| local.opus.institute | Institut für Tierärztliche Nahrungsmittelkunde | de_DE |
| local.opus.fachgebiet | Veterinärmedizin | de_DE |
| local.source.freetext | Giessen : VVB Laufersweiler | de_DE |
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