Die Transkriptionsregulation des Hepatitis-B-Virus in vitro, in vivo und unter dem Einfluss fremdviraler Proteine

Abstract

Ziel der Arbeit war es, eine möglichst genaue und empfindliche Darstellung der HBV-mRNA Expression zu erarbeiten. Früher verwendete Methoden zum Nachweis der HBV mRNAs sind zu unempfindlich und schwierig zu standardisieren. Anhand eines in vitro hergestellten RNA-Standards gelang die quantitative Bestimmung von HBV Replikations-Intermediaten und Gesamt-mRNA mittels der real time PCR (rtPCR) des LightCycler-Systems. Parallel hierzu erfolgte die Bestimmung von HBsAg aus den entsprechenden Zellüberständen. Von Interesse war weiterhin die Analyse der HBV Enhancer-Elemente in unterschiedlichen Zelllinien mittels HBV-Plasmid-Konstrukten. Hier war es unter anderem das Ziel, die Messung von HBV RNA- und HBsAg-Mengen in den transfizierten Zellen in Bezugnahme auf die Expression der Luciferase zu normieren. Mit Hilfe der erarbeiteten Techniken sollte dann der Effekt von ko-transfizierten Hepatitis-C-Virus-Genen (HCV) auf die HBV-Expression untersucht werden. Schließlich sollte die Technik zur quantitativen Messung der beiden HBV mRNAs auch auf Leberbiopsien angewendet werden und mit den sonstigen HBV-Parametern der Patienten verglichen werden. Die Ergebnisse sollten das Verständnis der Transkriptionsregulation von HBV vertiefen. A sensitive and exact description of the mRNA expression of the hepatitisBvirus (HBV) was the main point of the work. Former methods were too insensitive and difficult to standardize. The quantitative real-time LightCycler RT-PCR could be successfully optimized for the detection of HBV replicative intermediates and total-mRNA with an in-vitro generated RNA reference. In addition to that, HBsAg was assayed in cell culture supernatants. It was of further interest to investigate the two HBV enhancer elements in different cell lines. The intention was, among other things, to standardize the measurement of the HBV RNA and HBsAg in transfected cells in comparison to the luciferase expression. By means of the above established techniques the effect of co-transfected hepatitis-C-virus (HCV) genes on HBV RNA expression and HBsAg production should be investigated as well as the HBV RNA expression of liver biopsies in comparison to the other parameters of the patients. The results should provide a more profound insight in the transcriptional regulation of HBV expression.