Spezies-spezifischer Nachweis von Chlamydien bei Haustieren mittels Real-Time PCR
Lade...
Datum
Autor:innen
Betreuer/Gutachter
Weitere Beteiligte
Beteiligte Institutionen
Herausgeber
Zeitschriftentitel
ISSN der Zeitschrift
Bandtitel
Verlag
Lizenz
Zitierlink
Zusammenfassung
Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung und Etablierung von sensitiven undzuverlässigen Real-Time PCR-Assays zum Nachweis von Chlamydophila(Cp.) psittaci, Cp. abortus, Cp. pecorum, Cp. felis, Cp. caviae und Chlamydia(C.) suis. Dabei wurden DNA-Sequenzen der ompA- und 23S-rRNA-Gene für dendifferenzierten Erregernachweis herangezogen. Zur Identifizierung der Chlamydien-Spezies wurde mit Ausnahme von Cp. psittaci jeweils eine klassische TaqManÒ-Sonde entworfen. Aufgrund der großen Nukleotidsequenz-Homologie zwischenCp. psittaci und Cp. abortus wurden zur Identifizierung von Cp. psittaci zweiTaqManÒMGB-Sonden verwendet. Im Rahmen der Etablierung der Methodenwurden Tests zur Reproduzierbarkeit, Spezifität und Nachweisgrenze durchgeführt.Für alle entwickelten Real-Time PCR-Assays wurde eine Nachweisgrenze zwischen8 bis 80 Chlamydienpartikel und 4 bis 40 Einschlusskörperchen-bildenden Einheiten(EBE) pro Reaktionsansatz ermittelt. Alle verwendeten Assays erwiesen sich alsreproduzierbar, spezifisch und sensitiv.Um die tierartliche Häufigkeitsverteilung der verschiedenen tierpathogenenChlamydien-Spezies (Cp. psittaci, Cp. abortus, Cp. pecorum, Cp. felis, Cp. caviaeund C. suis) zu analysieren, wurden DNA-Proben von Psittaziden, Tauben undverschiedenen Säugetierarten, die bereits positiv auf Chlamydiaceae-DNA getestetworden waren, mit den Spezies-spezifischen Real-Time PCR-Assaysnachuntersucht. Auffallend ist, dass bei Psittaziden und Tauben nicht nur Cp. psittaci(92 %), sondern auch Cp. abortus (8 %) relativ häufig vorkam. Während beiSchweinen, Rindern, Schafen und Pferden DNA der Spezies Cp. psittaci,Cp. abortus, Cp. pecorum oder C. suis einzeln oder in Kombination festgestelltwerden konnten, wurde bei Katzen mit Cp. felis (135/138; 98 %) sowie beiMeerschweinchen und Kaninchen mit Cp. caviae (12/12 bzw. 4/4; 100 %)überwiegend die DNA nur einer einzigen Erregerspezies nachgewiesen. DNA dieserbeiden Chlamydophila-Spezies war auch in den Proben von Hunden (Cp. felis 4/5;80 % und Cp. caviae 1/5; 20 %) zu finden.Beim Vergleich der mit den Real-Time PCR-Assays und der Microarray-Technikerzielten Ergebnisse ließ sich bei 4 der 15 untersuchten Proben eine vollständigeÜbereinstimmung bei der Speziesidentifizierung von Chlamydien feststellen. In derProbe einer Katze wurde mit Hilfe der Microarray-Technik zusätzlich DNA vonC. trachomatis nachgewiesen, für die in dieser Arbeit kein entsprechender Real-TimePCR-Assay entwickelt worden war. Die 11 unterschiedlich bewerteten Probenenthielten DNA von wenigstens zwei Chlamydienarten, wobei die Microarray-Technikstets nur diejenige Spezies erkannte, die im Real-Time PCR-Assay den niedrigerenCT-Wert erzielte, d.h. das stärkere Signal erzeugte.Im Rahmen eines Ringversuches, an dem 16 deutsche Untersuchungseinrichtungenin Deutschland teilnahmen, wurden zwei Real-Time-PCR-Assays zum Nachweis vonChlamydiaceae- bzw. Cp. psittaci-DNA (Assays 1 und 12) auf ihre Eignung für dieveterinärmedizinische Psittakose-/Ornithose-Diagnostik geprüft. Dazu wurdeninsgesamt 25 Proben sowie eine Positiv- und eine Negativkontrolle an dieTeilnehmer verschickt und von diesen nach standardisierten Arbeitsprotokollenuntersucht. Beide Assays erwiesen sich als sensitiv und spezifisch und ergaben eineNachweisgrenze von 100 EBE je Probe.Die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit belegen, dass alle gegenwärtig in derVeterinärmedizin relevanten Chlamydien-Spezies mit Hilfe von Real-Time PCRAssayssensitiv und Spezies-spezifisch in entsprechend aufgearbeitetem Probenmaterialnachzuweisen sind. Alle untersuchten Chlamydien-Spezies kommen beiTieren in Deutschland vor. Dabei sind sie nicht auf eine einzelne Wirtsspeziesbeschränkt, sondern von ihren Hauptwirten offenbar auch auf Individuen andererArten übertragbar. Die Befunde deuten ferner daraufhin, dass Mischinfektionen durchzwei Chlamydien-Spezies nicht selten sind. Die Anwendung von Real-Time PCRAssaysin der Routinediagnostik kann insbesondere der in der Psittakose-VObegründeten Forderung nach dem spezifischen Nachweis von Cp. psittaci gerechtwerden.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler