Studien zur Neuroinvasion und zum axonalen Transport von Mutanten des Pseudorabiesvirus im Tiermodell und an Neuronenkulturen
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Zusammenfassung
1. Durch elektronenmikroskopische Untersuchungen konnte nachgewiesen werden, dass PrV in der murinen neuronalen Zellkultur intraaxonal anterograd in Form von vollständig umhüllten Viruspartikeln in Vesikeln transportiert wird.2. PrV-Bartha ist in vitro auch zum anterograden Kapsidtransport fähig.3. Die Deletion von pUS9 und pUL11 führte erst 48 h p.i. in Neuronen zum Nachweis von anterogradem Kapsidtransport. Dies konnte auch nach Doppeldeletion beider Proteine beobachtet werden.4. Die Deletion von gE führte in vitro nicht zur Beeinträchtigung des anterograden Transportes.5. Bei Abwesenheit von pUL37 fand 24 h p.i. kein anterograder Kapsidtransport statt.6. Die Proteine pUL37 und pUL36 sind nicht essentiell für den retrograden Transport zum Zellkern. In vivo fehlt bei Abwesenheit beider Proteine jedoch eine Neuroinvasion.7. In Mäusen erfolgte die In-vivo-Charakterisierung einzelner UL36-Deletionsmutanten. Dabei zeigte sich, dass die Deletion einzelner Aminosäuren am 3 - oder 5 - Ende lediglich eine leicht verzögerte Neuroinvasion zur Folge hatte.8. Der Austausch des aktiven Zentrums in der Deubiquitinierungsdomäne von pUL36 führte zu einer zweifach verlängerten Überlebenszeit in infizierten Mäusen.9. In-vivo-Untersuchungen mit PrV-UL35 und PrV-UL35GFP belegten, dass eine Fusion von pUL35 mit GFP zur funktionellen Deletion des Proteins führte.10. PrV-UL21/US3 zeigte in vivo einen stark veränderten Phänotyp im Vergleich zum Wildtyp. Die intranasale Inokulation führte nur bei der Hälfte der Tiere zum Tod. Pathohistologisch fand sich in den Mäusen eine hochgradige Meningoenzephalitis mit zahlreichen infizierten kortikalen Neuronen.11. In der neuronalen Zellkultur konnte nach Infektion von PrV-UL21/US3mCherry kein anterograder Kapsidtransport nachgewiesen werden.12. Die intradermale Inokulation von PrV-Kaplan in Mäusen führte zur Neuroinvasion über das Rückenmark und zum Nachweis infizierter Neuronen im somatosensorischen Cortex ab 90 h p.i.13. Die intranasale Infektion von Haus- und Wildschweinen mit PrV-NIA3 ergab eine mittlere Überlebenszeit von 5-7 d. Die histopathologischen und immunhistologischen Befunde sind in den Haus- und Wildschweinen identisch.14. Mittels Real-time PCR gelang der Nachweis von PrV-DNA bei allen Tieren aus Tonsille, Trigeminalganglion und Großhirn.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler 2011