Veränderte Transkriptionsregulation des Hepatitis B Virus bei einer Variante mit einer 8-Basenpaar-Deletion im Core-Promotor

Abstract

Der Core-Promotor/Enhancer II des Hepatitis B Virus ist gehäuft von Mutationen betroffen. Aus Untersuchungen anderer Gruppen istbekannt, daß dadurch Bindungsstellen für Transkriptionsfaktoren entstehen oder wegfallen können. Hierdurch wird die Expression undReplikation des viralen Genoms beeinflußt. Die in der vorliegenden Arbeit untersuchte Variante mit der 8-Basenpaar-Deletion derNukleotide 1763-1770 wird häufig bei immundefizienten bzw. immuntoleranten Virusträgern gefunden. Durch diese Mutation entsteht eine Sequenz, die eine neuartige Bindungsstelle für den hepatischen nukleären Faktor 1 (HNF1) darstellenkönnte. Um dies näher zu untersuchen, wurde in einem Elektrophoretic-Mobility-Shift-Assay die Bindung von HNF1 an die Variante und denWildtyp untersucht. Dabei stellte sich heraus, daß in der Variante tatsächlich eine neue, wenn auch schwache HNF1-Bindungsstelleentsteht. Um die transaktivierende Wirkung des ebenfalls betroffenen verkürzten X-Gens der Variante mit der des Wildtyp-X zu vergleichen, wurdenKonstrukte mit und ohne 8-bp-Deletion konstruiert. Daraufhin wurde die transaktivierende Wirkung des X-Genprodukts auf denSV40-Promotor in Versuchen mit Luciferase als Reportergen auf die Expression gemessen. Dabei ergab sich eine schwächere Aktivitätder Variante. Desweiteren wurde der Einfluß der Transkriptionsfaktoren HNF1, HNF4 und COUP-TF1 auf die Promotoren mit der 8-bp-Deletionuntersucht. Hierzu wurden jeweils für den Wildtyp und die Variante der Core- und PräC-Promotor in Luciferasevektoren kloniert. InLuciferase-Versuchen ergab sich, daß sowohl HNF1 als auch HNF4 die Expression des Core-Promotor/Enhancer II nur unwesentlichbeeinflussen. Interessanterweise transaktivierte COUP-TF1 sowohl den PräC- als auch den Core-Promotor des Wildtyps und der Variante sehr stark,solange der Enhancer II in den Konstrukten nicht vorlag. Untersuchungen aus unserer Gruppe zeigten dagegen, daß die reinen EnhancerII-Konstrukte ohne Promotor durch COUP-TF1 reprimiert wurden. Andere Gruppen haben die Wirkung von COUP-TF1 nur auf solcheKonstrukte untersucht, die sowohl den Enhancer II als auch die PräC- und Core-Promotoren enthielten. Hierbei wurde nur Repressiongefunden. In diesem System wirkt also der Enhancer II als Silencer. In der natürlichen HBV-Infektion ist jedoch der Core-Promotor sehraktiv, so daß die hier vorliegenden Befunde relevanter erscheinen.