Die Expression von c-myc während der Auswanderung von Prämyoblasten in die Gliedmaßenanlage des Vogelembryos und die Validierung von Konstrukten zur Funktionsanalyse durch RNAi
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Zusammenfassung
Die Gliedmaßenentwicklung ist Gegenstand vieler wissenschaftlicher Untersuchungen. Allerdings ist noch nicht vollständig geklärt, ob die Auswanderung der Prämyoblasten aus der lateralen Dermomyotomlippe in die Gliedmaßenanlage durch Proliferation, Motilität oder einer Mischung aus beidem zustande kommt.Da c-Myc eine essentielle Rolle in der Zellproliferation spielt, eignet es sich gut dazu, mit Hilfe der Methode der RNAi diese Fragestellung zu beantworten. Als Grundlage hierfür wurde zunächst die Expression von c-myc während der Auswanderung der Prämyoblasten in die Gliedmaßenanlagen des Vogelembryos in den Stadien HH 17 bis HH 30 untersucht. Das Ergebnis ist eine deutliche Expression im Sklerotom, in der medialen und der lateralen Dermomyotomlippe, in den migrierenden Prämyoblasten und den Vormuskelmassen. Im nächsten Schritt wurden die zuvor hergestellten shRNA-Konstrukte zum Knockdown von c-myc an Hühnerembryonen getestet. Eine Mischung aus den Plasmiden H1 677 und H1 1374 führte zu einem Silencing-Effekt. Mit diesen Konstrukten wird somit die Möglichkeit geschaffen, die Fragestellung der Auswanderungsmethode der Prämyoblasten in weiteren Forschungsarbeiten zu klären.Um einen Ausblick auf mögliche weitere Vorgehensweisen in Folgearbeiten zu geben, wurde sowohl das Migrationsverhalten der mit dem shRNA-Konstrukt transfizierten Zellen, als auch die Auswirkungen eines Knockdowns von c-myc auf die Expression von Pax3 durch erste Versuche beurteilt. Ein großer Teil der transfizierten Zellen bleibt in der lateralen Dermomyotomlippe zurück, was mit großer Wahrscheinlichkeit auf eine verringerte Proliferationsrate der Zellen zurückzuführen ist. Eine weitere Ursache stellt die Herunterregulierung der Expression von Pax3 dar, was wiederum zu einer negativen Expressionskontrolle von c-met und Lbx1 führt. Der andere Teil der transfizierten Zellen migriert die physiologische Strecke in die Gliedmaßenanlagen, um dort die Vormuskelmassen zu bilden. Dies erfolgt mit großer Wahrscheinlichkeit durch Motilität der Zellen aufgrund von CXCR4/SDF1 sowie einer noch gering vorhandenen Expression von c-met.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler 2009