Die Transkriptionsregulation des Hepatitis-B-Virus in vitro, in vivo und unter dem Einfluss fremdviraler Proteine

Ziel der Arbeit war es, eine möglichst genaue und empfindliche Darstellung der HBV-mRNA Expression zu erarbeiten. Früher verwendete Methoden zum Nachweis der HBV mRNAs sind zu unempfindlich und schwierig zu standardisieren. Anhand eines in vitro hergestellten RNA-Standards gelang die quantitative Bestimmung von HBV Replikations-Intermediaten und Gesamt-mRNA mittels der real time PCR (rtPCR) des LightCycler-Systems. Parallel hierzu erfolgte die Bestimmung von HBsAg aus den entsprechenden Zellüberständen. Von Interesse war weiterhin die Analyse der HBV Enhancer-Elemente in unterschiedlichen Zelllinien mittels HBV-Plasmid-Konstrukten. Hier war es unter anderem das Ziel, die Messung von HBV RNA- und HBsAg-Mengen in den transfizierten Zellen in Bezugnahme auf die Expression der Luciferase zu normieren. Mit Hilfe der erarbeiteten Techniken sollte dann der Effekt von ko-transfizierten Hepatitis-C-Virus-Genen (HCV) auf die HBV-Expression untersucht werden. Schließlich sollte die Technik zur quantitativen Messung der beiden HBV mRNAs auch auf Leberbiopsien angewendet werden und mit den sonstigen HBV-Parametern der Patienten verglichen werden. Die Ergebnisse sollten das Verständnis der Transkriptionsregulation von HBV vertiefen.