Der Einfluss von blutigem Liquor auf humane Astrozyten in vitro
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Zusammenfassung
Ziele: Die Ca2+-Konzentrationserhöhung ist ein Kofaktor von vielen Zellprozesseneinschließlich Apoptose und Nekrose. Die Hypothese von dieser Studie war, dass blutigerzerebrospinaler Liquor (bCSF) von Patienten nach intraventrikulärer Blutung einen Ca2+-Anstieg verursachen konnte, der Apoptose oder Nekrose in humanen Astrozyteninduziert.Methode: Humane Astrozyten wurden mit bCSF inkubiert. In Kontrollexperimenten wurdenativer zerebrospinaler Liquor (nCSF) verwendet.Die zytosolischen Ca2+-Konzentration von den einzelnen Zellen wurde mit dem Ca2+-sensitiven Farbstoffe (Fura-2) gemessen. Vier Blocker wurden verwendet: Nimodipin (LTyp-Calciumkanale Hemmer), 2-aminoethoxydiphenyl-borate (2APB) (IP3-Rezeptorenblocker des endoplasmatischen Retikulums), Suramin (P2-Rezeptorenantagonist), D (-)-2-amino-5-phosphonopentanoic-acid (2A5P) (NMDARezeptorblocker),und Cyclosporin A (MPTP-Inhibitor). Zur Messung von Nekrose undApoptose wurden Astrozyten mit Hoechst-33342 und Propidium Iodid markiert.Die Ergenisse der vorgelegten Arbeit zeigen:1) dass blutiger zerebrospinaler Liquor Nekrose in humanen Astrozyten induziert unddass die zytosolische Ca2+-Konzentrationserhöhung eine wichtige Rolle bei derEntstehung von bCSF-induzierter Nekrose spielt,2) dass die zytosolische Ca2+-Konzentrationserhöhung und die Nekrose von derAktivierung P2-Rezeptoren und IP3-abhängiger Ca2+-Kanäle amendoplasmatischen Retikulum abhängig sind,3) dass eine Blockade der P2-Rezeptoren durch Suramin den Ca2+-Anstieg und dieNekroserate reduziert, während NMDA-Blockade durch D(-)-2-Amino-5-Phosphonopentanoic Acid keine signifikante Veränderung auf den Ca2+-Anstiegbzw. die Nekroserate bewirkt,4) dass der ATP-Gehalt in bCSF gegenüber nCSF um ungefähr das 400-facheerhöht ist,5) dass eine Hemmung der Ca2+-Kanäle vom L-Typ durch Nimodipine zu einergeringen aber gerade signifikanten Verringerung des Ca2+-Anstiegs und derNekroserate führt,6) dass eine Blockade der IP3-Rezeptoren durch 2APB den Ca2+-Anstieg und dieNekroserate reduziert, und dass eine Blockade der MPTP durch Cyclosporin A zursignifikanten Nekrose-Reduktion ohne Einfluss auf die zytosolische Ca2+-Kinetikführt.Schlussfolgerung:Blutiger zerebrospinaler Liquor verursacht Nekrose in humanen Astrozyten. Die bCSFinduzierteNekrose wird durch einen zytosolischen Ca2+-Anstieg verursacht, der durchCa2+-Freisetzung aus dem ER zustande kommt. Diese Ca2+-Freisetzung wird durch dieAktivierung der P2Y-Rezeptoren durch ATP vermittelt.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler