Neovaskuläre Erkrankungen des Auges basieren auf einer hypoxieinduzierten Hochregulation der VEGF Expression. Die Therapie besteht deswegen in der intraokulären Injektion von sogenannten Anti-VEGF Molekülen die das VEGF binden und somit eine Interaktion und Aktivierung mit dessen Rezeptoren verhindern.In dieser Arbeit sollte ein System zur regulierbaren Expression von Anti-VEGF Molekülen nach viralem Adeno-assoziierten Gentransfer generiert und in vitro charakterisiert werden. Ein System zur regulierbaren Anti-VEGF Expression von den Zellen des Auges würde wiederholte intraokuläre Injektionen und die damit verbundenen Probleme vermeiden. Des Weiteren sollte ein in vivo kompatibles Messsystem zur Quantifikation von VEGF im Auge hergestellt und in vitro charakterisiert werden.Es wurde ein Anti-VEGF Fab Fragment und unterschiedliche scFab Fragmente generiert und biologisch charakterisiert. Das Fab Fragment und die kürzeste, aktivste scFab Molekülvariante wurden unter die Kontrolle des TetOn Systems gestellt. Die scFab Expressionskassette wurde in AAV (Adenoassoziierter Virus) verpackt. Die durch das Tetracyclinderivat Doxycyclin regulierbare Expression wurde nach Plasmidtransfektion und AAV Transduktion verifiziert. Es konnte erfolgreich ein Anti-VEGF Molekül reguliert als scFab Fragment nach AAV vermitteltem Gentransfer exprimiert werden das VEGF inhibierende Eigenschaften aufweist. Es kann potentiell als Therapeutikum genutzt werden um nach einmaliger subretinaler Injektion und AAV Transduktion von Photorezeptoren und RPE nur durch die orale Gabe von Doxycyclin das Anti-VEGF Molekül gezielt exprimiert zu können.Das bereits charakterisierte scFab Fragment wurde dazu benutzt um proteinbasierte Biosensoren auf dem Prinzip des Biolumineszenz Resonanz Energie Transfers (BRET) herzustellen. Die Expression wurde verifiziert und die Quantifikation von VEGF in vitro überprüft. Es konnte so eine auf BRET basierende VEGF Biosensorvariante hergestellt und charakterisiert werden mit der eine sensitive Quantifikation von VEGF möglich ist. Da es sich bei dem Biosensor um ein exprimierbares Protein handelt kann er potentiell in vivo zum Beispiel verankert auf der Oberfläche von Zellen in implantierbaren Systemen verwendet werden.
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