Leukämien sind die häufigsten Krebserkrankungen im Kindesalter. Sie entstehen in den meisten Fällen aufgrund von chromosomalenTranslokationen, die die Struktur und normale Funktion von Genen verändern, die in der gesunden Zelle Proliferations- undDifferenzierungsprozesse kontrollieren. Ein wiederholt bei akuten myeloischen und lymphatischen Leukämien betroffener Locus ist dasMLL-Gen auf Chromosom 11q23. Bislang sind über 40 verschiedene Translokationen unter MLL-Beteiligung identifiziert worden. Allemolekular charakterisierten Translokationen zeigten, dass sie zur Entstehung von Fusionsproteinen aus einem N-terminalen MLL-Anteil undeinem C-terminalen Partnergenanteil führen.
Ziel dieser Arbeit war es, die kürzlich identifizierten MLL-Fusionspartner GRAF und FBP17 molekulargenetisch zu charakterisieren. DerGRAF-Promotor wurde mittels Reportergenassays auf regulative Elemente hin untersucht, und mit Hilfe des Yeast One Hybrid Systemswurde nach Bindungsproteinen in Promotorbereichen gesucht. Mittels quantitativer real-time PCR wurde der Einfluss derDNA-Methylierung und Histon -Acetylierung auf die GRAF-Expression bestimmt. Darüber hinaus wurde die Wirkung des GRAF-Proteinsauf verschiedene Signaltransduktionswege getestet. Schließlich erfolgte mit dem Yeast Two Hybrid System eine Suche nach potenziellenInteraktionspartnern des GRAF- und FBP17-Proteins.
Es konnte gezeigt werden, dass der GRAF-Promotor methylierungssensitive Bereiche enthält. Behandlung mit demethylierendenReagenzien führte zu einer Steigerung der GRAF-Expression in 3 von 5 untersuchten Zelllinien, induzierte Hyperacetylierung steigerte dieExpression in allen 5 Leukämiezelllinien. Expression des GRAF-Proteins in transfizierten Zellen führte zu einer Aktivierung der JNK- undNFk B-Signaltransduktionswege. Die GRAF-Interaktionspartner (z.B. FAK2) lassen eine Verbindung des Proteins zumIntegrin-Signaltransduktionsweg vermuten und damit auch zur RAS-vermittelten Proliferationsregulation.
FBP17 interagiert mit dem Sorting Nexin SNX2 und Tankyrase, wobei die Interaktion mit Tankyrase spezifisch von der SH3-Domäne vonFBP17 vermittelt wird. FBP17 könnte so eine integrierende Funktion erfüllen, die den SNX2-vermittelten endosomalen Proteintransport mitstrukturellen und regulativen Fähigkeiten der an den Golgi-Apparat gebundenen Tankyrase verknüpft.
