Einfluss des Calcium-aktivierten Kaliumkanals auf die Lysophosphatidylcholin induzierte Monozytenadhäsion an humanen Endothelzellen
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Ziel der vorliegenden Arbeit war es herauszufinden, ob die Lysophosphatidylcholin(LPC) induzierte Aktivierung des BKCa an der Monozytenadhäsion von U937-Zellenan humanen Nabelschnur Endothelzellen (HUVEC) beteiligt ist.Dabei wurde der Einfluss des BKCa auf das Membranpotential mit demFluoreszenzfarbstoff DiBAC gemessen. Die calcium- und radikalabhängige Adhäsionwurde mit Hilfe des 3[H]-Thymidin-Adhäsions-Assays untersucht. Die calcium- undradikalabhängige Expression der Adhäsionsmoleküle ICAM und VCAM wurde mitHilfe der Durchflusszytometrie gemessen.LPC induzierte eine konzentrationsabhängige Hyperpolarisation von HUVEC miteinem Maximum bei 20 myM. Weitere Konzentrationserhöhungen zeigten hierbeikeinen steigernden Effekt. Deshalb wurden alle weiteren Versuche mit einerKonzentration von 20 myM durchgeführt. Der hoch spezifische BKCa-InhibitorIberiotoxin (IBX) konnte die Hyperpolarisation verhindern (IBX, 100 nM). Dies deutetdarauf hin, dass dieser Ionenkanal für die Hyperpolarisation der Zellmembranverantwortlich ist.Es konnte gezeigt werden, dass die Adhäsion von unstimulierten U937-Zellen durchStimulation der HUVEC mit LPC verstärkt werden konnte. Dieser Effekt war zeitlichabhängig und nach t=4 Stunden gegenüber der Kontrolle signifikant. Die Stimulationvon U937-Zellen führte nicht zu einer Steigerung der Adhäsion an unstimuliertenHUVEC. Dies deutet darauf hin, dass die Adhäsion hauptsächlich von endothelialerSeite auszugehen scheint. Die LPC induzierte Adhäsion konnte signifikant verringertwerden, wenn die HUVEC mit IBX, beziehungsweise dem NADPH-Oxidase-InhibitorDiphenyleneiodonium (DPI, 5 myM) koinkubiert wurden. Ebenfalls verringerte dieHemmung der intrazellulären Calciumkonzentration durch den Calciumkanalblocker2-amino-ethoxy-diphenyl-borate (2-APB, 100 myM) sowie den Calciumchelator BAPTA(10 myM) die LPC induzierte Adhäsion signifikant. In den FACS-Versuchen konnteLPC die Expression der Adhäsionsmoleküle ICAM und VCAM signifikant steigern.Durch Zugabe von IBX, DPI und BAPTA wurde die Expression von ICAM und VCAMebenfalls signifikant verringert.Zusammenfassend kann man sagen, dass die zeitabhängige Adhäsion sowie dieExpression der Adhäsionsmoleküle ICAM und VCAM von der intrazellulärenCalcium- und Radikalkonzentration abhängig sind und diese vom BKCa reguliertwerden.Link to publications or other datasets
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Giessen : VVB Laufersweiler