Charakterisierung des Invasionsmechanismus des Virus der bovinen viralen Diarrhöe (BVDV)
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Zusammenfassung
Der Invasionsmechanismus von BVDV wurde unter besonderer Berücksichtigung des Penetrationsmechanismus und der Charakterisierung der CRIB-Zellen untersucht. Dabei wurden folgende Ergebnisse erzielt: 1.) Mittels verschiedener biomechanischer (Dynamin), chemischer (Chlorpromazin und ß-Methylcyclodextrin) und biophysikalischer (intrazelluläre K+-Depletion und Hyperosmolarität) Inhibitionsmethoden wurde die Rolle der rezeptorvermittelten Endozytose bei der Invasion von BVDV untersucht. Jede dieser Methoden führte zu einer Hemmung der BVDV Infektion. Damit wurde eindeutig gezeigt, daß BVDV mittels rezeptorvermittelter Endozytose in die Wirtszelle aufgenommen wird. Obwohl keine dieser Methoden spezifisch ausschließlich die Clathrin-abhängige Endozytose hemmt, spricht die Kombination dieser Ergebnisse dafür, daß es sich bei der Internalisierung von BVDV um Clathrin-abhängige Endozytose handelt. 2.) BVDV benötigt einen saures endosomales Milieu für eine Infektion, zeigt aber keine Empfindlichkeit gegenüber niedrigen pH-Werten, wie es für andere endosomal aufgenommene, behüllte RNA-Viren beschrieben ist. Diese pH-Stabilität war in Kombination mit einer Reduktion der viralen Disulfidbrücken deutlich abgeschwächt. Zusätzlich wurde gezeigt, daß BVD Virionen nach erfolgter Adsorption nur in Anwesenheit reduzierender Substanzen mit der Zellmembran fusionieren konnten. Damit konnte der Gegensatz von pH-Stabilität und pH-Abhängigkeit auf eine mögliche Stabilisierung des Virions durch intermolekulare Disulfidbrücken der viralen Glykoproteine zurückgeführt werden. Diese Stabilisierung stellt einen fundamentalen Unterschied zu den Invasionsmechanismen anderer behüllter RNA-Viren dar. 3.) Molekularbiologische und biochemische Untersuchungen bewiesen, daß bCD46CRIB als zellulärer Rezeptor für BVDV funktionell ist und damit als Ursache der Resistenz der CRIB-Zellen nicht in Frage kommt. Die Existenz und Funktion des LDL-Rezeptors in CRIB-Zellen wurde ebenfalls nachgewiesen und damit als Ursache der Resistenz ausgeschlossen. Mittels Bindungs- und Internalisierungstests wurde gezeigt, daß CRIB-Zellen signifikant weniger BVD Virus binden können als MDBK-Zellen und kein BVDV internalisieren. MDBK-Zellen, deren Vesikelabschnürung blockiert war, zeigten ein identisches Internalisierungsprofil wie CRIB-Zellen. Die vermutliche Lokalisation der für den Phänotyp der CRIB-Zellen verantwortlichen Mutation konnte damit auf die Zellmembran eingeschränkt werden.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Wettenberg : VVB Laufersweiler 2004