Die molekularen Mechanismen der biliären Elimination des Angiotensin-II-Rezeptor-Antagonisten Valsartan wurden in vivo und mit Hilfevon kanalikulären Plasmamembranvesikeln, isoliert aus der Leber von normalen Wistar-Ratten und transportdefizienten TR--Ratten,untersucht.
Nach intravenöser Injektion von [14C]-Valsartan ( 1 mg / kg ) in eine Mesenterialvene, wurde die radioaktiv markierte Substanz rasch in dieGalle von normalen Wistar-Ratten eliminiert. Drei Stunden nach der Injektion konnten 81 % der Substanz in der Galle festgestellt werden. ImGegensatz dazu wurde [14C]-Valsartan bei TR--Ratten, die einen Defekt des kanalikulären Transportes organischer Anionen aufweisen (Fehlen des Transportsystems Mrp2 / cMoat ), hauptsächlich im Blut angereichert, nur 39 % wurden über die Galle ausgeschieden.
In isolierte kanalikuläre Plasmamembranvesikel von normalen Wistar-Ratten wurde [14C]-Valsartan ATP-abhängig aufgenommen. DieserATP-abhängige Anteil des Transportes war in isolierte Plasmamembranvesikel von TR--Ratten um 50 % vermindert. Dies deutet daraufhin, dass Valsartan ein Substrat des kanalikulären multispezifischen organischen Anionen Trans-porters cMoat / Mrp2 ist sowie einesanderen ATP-abhängigen Transporters, welcher auch in TR--Ratten exprimiert wird.
Die ATP-abhängige Aufnahme von [14C]-Valsartan in isolierte kanalikuläre Plasmamembranvesikel von normalen Wistar-Ratten stieg biszu einer Sättigung an, wenn bei einer Valsartan-Konzentration von 57 µM die ATP-Konzentration von 0,5 auf 3,0 mM erhöht wurde ( Km (ATP ) = 1,449 mM, vmax ( ATP ) = 62,22 pmol / mg Protein x Minute ). ATP in Gegenwart oder Abwesenheit eines ATP-regenerierendenSystems war von den verschiedenen Nukleotiden, die untersucht wurden, für die Valsartan-Aufnahme am effektivsten. Die nichthydro-lysierbaren Analoga ( AMP, Adenosin, AMP-PCP ) konnten die Aufnahme nicht signifikant steigern. Für transportkinetische Studien wurde Valsartan in einem weiten Konzentrationsbereich eingesetzt ( 10 - 500 µM ). Eine Sättigung wurdebei der ATP-abhängigen ( Km = 65,91 µM, vmax = 145,83 pmol / mg Protein x Minute ) wie auch bei der ATP-unabhängigen Aufnahme (Km = 264,94 µM, vmax = 1322,69 pmol / mg Protein x Minute ) beobachtet. Diese ATP-unabhängige Aufnahme wurde in der vorliegendenStudie nicht weiter charakterisiert.
Die ATP-abhängige Valsartan-Aufnahme ist temperaturabhängig. Eine nicht signifikante Vesikel-assoziierte [14C]-Valsartan-Aufnahmekonnte bei einer Temperatur von 7 °C festgestellt werden. Wurde die Temperatur von 7 °C auf 17 °C, 27 °C und 37 °C erhöht, so nahmauch die ATP-abhängige Aufnahme von [14C]-Valsartan zu. Q10-Werte zwischen 1,4 und 7 sprechen für einen transmembranärenTransport. Nach Transformation der Daten in Anlehnung an Arrhenius konnte eine scheinbare Aktivierungsenergie von 67,342 kJ / molermittelt werden.
Darüber hinaus wurde die ATP-abhängige Aufnahme von [14C]-Valsartan durch den pH-Wert und die Osmolarität des Inkubationsmediumsbeeinflusst. Durch Transformation der Daten in einen Osmoplot konnte die unspezifische Bindung von [14C]-Valsartan an die Membranenermittelt werden.
GSSG, Pravastatin und BSP, typische Substrate des kanalikulären multispezifischen Anionen- Transporters Mrp2 / cMoat, sind potentielleInhibitoren des Transportes von [14C]-Valsartan. Auch Leukotriene C4, das Substrat mit der höchsten Affinität, hemmte die ATP-abhängigeAufnahme von [14C]-Valsartan kompetitiv. Doch weder Taurocholat und Cholat, Substrate des kanalikulären Gallensäuretransporters, nochDaunomycin und Verapamil, Substrate des P-Glykoproteins ( Mdr1 ), zeigten einen hemmenden Effekt.
Diese Ergebnisse lassen den Schluss zu, dass der Angiotensin-II-Rezeptor-Antagonist Valsartan über die Galle durch das kanalikuläremultispezifische organische Anionen Transportsystem Mrp2 / cMoat eliminiert wird, und dass darüber hinaus ein zweites ATP-abhängigesTransportsystem beteiligt ist, aller Wahrscheinlichkeit nach eines der neuen Mitglieder der Mrp-Familie.
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