Expressionsanalyse Interferon-alpha-positiver und -negativer humaner plasmacytoider dendritischer Zellen
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Zusammenfassung
Humane plasmacytoide dendritische Zellen (pDCs) übernehmen verschiedene Funktio-nen im Immunsystem, wie die Abwehr von Viren und die Aufrechterhaltung von peri-pherer und zentraler Toleranz. Sie sind in der Lage, das adaptive und erworbene Immunsystem zu verbinden. Die pDCs zeichnen sich durch ihr Haupt-Produkt das IFN-alpha aus. Dadurch erlangen sie die Möglichkeit, TH1-Immunantworten zu bewirken. Da ihre teilweise konträren Aufgaben im Immunsystem hierdurch alleine nicht erklärt werden können, stellt sich die Frage, ob die pDCs noch weitere Zytokine produzieren können und ob sie anhand dieser Fähigkeit in Subpopulationen unterteilt werden könn-ten.Um dieser Fragestellung nachzugehen, wurden PBMCs aus Rest-Buffy Coats von ge-sunden jungen Spendern isoliert, mit einem Gemisch aus CpG-ODN 2216 (5 µg/ml), IL-3 (20 ng/ml) und Dotap (1 µg/µl) stimuliert und anschließend für fünf Stunden unter geeigneten Bedingungen inkubiert. Im weiteren Verlauf wurden die pDCs mit einem Oberflächenmarker für IFN-alpha markiert und mit verschiedenen Antikörpern angefärbt, um die Population einzugrenzen. Hierfür wurden neben IFN-alpha, Lineage Cocktail 1, BDCA-4 und CD123 verwendet, wodurch sie im Anschluss in eine Subfraktion IFN-alpha-positiver pDCs und IFN-alpha-negativer pDCs separiert werden konnten. In Vorbereitung auf die Durchführung einer RT-PCR und eines DNA-Oligonukleotid-Microarray-Experiments wurde die RNA aus den Zellen isoliert und in cDNA umgeschrieben. Sowohl in der RT-PCR als auch im DNA-Oligonukleotid-Microarray-Experiment zeig-ten sich unterschiedliche Genexpressionen in beiden Subfraktionen. Die Gruppe der IFN-alpha-positiven Zellen zeichnete sich u.a. durch Gene für IFN-alpha, IL12p35, TNSF11, COX-2, Indolamin-2,3-dioxygenase und den IL-10-Rezeptor-alpha aus. Die Gruppe der IFN-alpha-negativen Zellen konnte hingegen Gene für u.a. TNSF13B, Inhibin-betaA, TNSF4, Vitamin-A-Rezeptor-alpha, PGI2 und den TGF-beta-Rezeptor2 vorweisen. Es bleibt ein weite-res Ziel diese Ergebnisse auch auf Protein-Ebene zu verifizieren.Innerhalb dieses Projektes war es möglich, die Gruppe der pDCs in zwei Untergruppen zu separieren eine positiv für IFN-alpha und eine negativ für IFN-alpha. Es zeigte sich eine unterschiedliche Expression von funktionell wichtigen Molekülen innerhalb der beiden Gruppen.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler