Etablierung einer Methode zur Untersuchung der Endozytose von Chylomikronen durch Leukozyten

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Chylomikronen sind Lipoproteine die durch eine geringe Dichte, große Partikeldurchmesser und einen hohen Triglycerid-Anteil charakterisiert sind. Ihre Hauptfunktion ist der Transport von Nahrungslipiden über die Lymph- und Blutbahn zu verschiedenen Geweben. Ob eine Aufnahme von Chylomikronen durch T-Zellen erfolgt und die T-Zellfunktion beeinflusst, wurde bisher wenig untersucht. In dieser Arbeit wurde eine Methode entwickelt, die eine Beobachtung der Endozytose von Chylomikronen durch Leukozyten ermöglicht. Die Isolierung der Chylomikronen aus Plasma erfolgte durch mehrere Zentrifugations- und Waschschritte. Durch Elektrophorese sowie durch Western-Blot Analyse mit Apolipoprotein B-48-Antikörpern wurden Chylomikronen in der Endpräparation nachgewiesen. Diese wurden mit Fluorescein-Isothiocyanat (FITC) konjugiert. Gebundenes FITC konnte durch Western-Blot-Analyse mit einem anti-FITC-Antikörper nachgewiesen werden. Für die Endozytoseversuche wurden zwei T-Zellrezeptor-positive Zelllinien (MOLT 14 und MOLT 16) und eine Makrophagenzelllinie (Mono-Mac-6) verwendet. Nach Inkubation mit FITC-markierten Chylomikronen wurde bei allen drei Zelllinien eine Fluoreszenz der Zellen durchflusszytometrisch nachgewiesen. Durch konfokale Mikroskopie wurden zytoplasmatische, teilweise granuläre fluoreszierende Strukturen beobachtet. Die Ergebnisse der Arbeit bestätigen die spezifische Aufnahme von Chylomikronen durch Zellen des Immunsystems.

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