Etablierung eines revers genetischen Systems für feline Coronaviren
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Zusammenfassung
Im Rahmen dieser Arbeit erfolgte die Etablierung eines revers-genetischen Systems für ein Serotyp I felines Coronavirus (FCoV). Dabei wurden folgende Ergebnisse erzielt: 1) Als Grundlage für die Etablierung des Systems wurde die komplette Genomsequenzdes FCoV Stammes Black bestimmt und anhand dieser Sequenz der Genomaufbauermittelt. Es ließ sich der für Coronaviren typische Genomaufbau nachweisen. 2) Die Herstellung eines infektiösen Klons beinhaltete die Integration einer komplettencDNA Kopie des FCoV Stammes Black in das Vaccinia Virus Genom, welches alsVektor diente. Die coronavirale cDNA wurde in vitro transkribiert und die synthetischeRNA in Zellen elektroporiert. Rekombinante FCoV ließen sich nachweisen und somitwar die synthetische RNA infektiös, also in der Lage, den coronaviralenReplikationszyklus zu initiieren und zu durchlaufen. Die Analyse der gewonnenenrekombinanten Viren erfolgte nach Infektion feliner Zellkulturen mit verschiedenenAnsätzen. Dabei konnte festgestellt werden, dass die rekombinanten Viren diegleichen Eigenschaften wie der ursprüngliche FCoV Stamm Black besitzen. 3) In nachfolgenden Versuchen erfolgte die Herstellung zweier ReportergenexprimierenderFCoV mit dem etablierten revers-genetischen System. Dabei wurdenim FCoV Stamm Black Genom die akzessorischen Gene 3abc durch das greenfluorescent protein (GFP) oder Renilla Luciferase ersetzt. Die stabile Expression derReportergene konnte in felinen Zellkulturen nachgewiesen werden. 4) Feline Monozyten, Makrophagen und dendritische Zellen (DCs), die als Zielzellensowohl von FCoV als auch von anderen Coronaviren gelten, wurden mit Wildtyp undden Reportergen-exprimierenden FCoV in vitro infiziert. Die Infektion vonmonozytären Zellen konnte ausschließlich mit Hilfe der GFP exprimierendenMutanten nachgewiesen werden.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen : VVB Laufersweiler 2008