Charakterisierung ruminanter Pestiviren mittels Polymerasekettenreaktion und monoklonaler Antikörper
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Zusammenfassung
Innerhalb der Familie Flaviviridae umfasst das Genus Pestivirus das Virus der bovinen Virusdiarrhö (BVDV-1 und 2), das Virus der klassischen Schweinepest (KSPV) und das Border Disease Virus der Schafe (BDV). Pestiviren infizieren Schweine, Wild- und Haus-wiederkäuer und werden weltweit als Erreger ökonomisch bedeutender Infektionskrankheiten von Nutztieren betrachtet. Die genetische und antigenetische Variabilität innerhalb des Genus Pestivirus lässt die Unterteilung der Pestivirusspezies in Subgruppen zu. In dieser Arbeit wurden 293 Isolate ruminanter Pestiviren, die zwischen 1996 und 2002 isoliert wurden, mittels diskriminierender RT-PCR und real time RT-PCR untersucht. Primer wurden in der 5 nicht-translatierten Region (5 NTR) des Pestivirusgenoms und im Bereich des Npro-Gens etabliert, da für diese Genombereiche bereits zahlreiche Sequenzdaten publiziert wurden. 218 bovine Isolate (78%) aus 127 Beständen (82.5%) aus Deutschland waren BVDV-1 positiv, während 58 bovine Isolate (21%) aus 22 Beständen (14.3%) als BVDV-2 infiziert eingestuft wurden. In 5 Beständen (3.2%) ließen sich BVDV-1 und BVDV-2 nachweisen. 9 bovine Isolate aus England und Frankreich, ein Isolat aus einer Antilope sowie 3 Isolate aus kontaminierten Zelllinien bzw. Seren wurden mittels RT-PCR ebenfalls als BVDV-1 klassifiziert, ein Rinderisolat aus Brasilien als BVDV-2. Ein Isolat (ED) aus einer kontaminierten Zelllinie wurde nur mittels real time RT-PCR als BVDV-2 eingestuft. Von 37 bestimmten Npro-Sequenzen wurden 15 Isolate aus Deutschland den Subgruppen BVDV-1a, b, d und f zugeordnet; 6 bovine Isolate aus Deutschland wurden als BVDV-2a klassifiziert; das Isolat aus Brasilien (s.o.) als BVDV-2b. Zwei Isolate aus Schafen wurden als Vertreter einer möglichen neuen Spezies oder Subgruppe von BDV (BDV-2) charakterisiert, die Isolate Antelope-Pronhorn und Hobi als mögliche neue Spezies innerhalb des Genus Pestivirus.Weiterhin wurden in dieser Arbeit monoklonale Antikörper gegen das E2 Protein von BVDV nach Immunisierung mit rekombinantem E2 der Stämme BVDV-1 CP7 und BVDV-2 890 gewonnen. Die 7 monoklonalen Antikörper erkannten in verschiedenen Testsystemen nur ruminante Pestiviren. Die gewonnenen mAk wurden mittels Immunfluoreszenz, Immunoblot, Neutralisationstest und Immunelektronenmikroskopie charakterisiert. Mit Hilfe der neu gewonnenen Antikörper wurde ein ELISA zum Nachweis von E2 aus Zellextrakten aufgebaut und optimiert. Weitere Versuche zur Etablierung eines Nachweissystems auch aus Untersuchungsmaterial und zur Quantifizierung von E2 z.B. in Impfstoffpräparationen werden durch die neue hergestellte Reagenzien ermöglicht.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Giessen: http://www.dvg.net/ DVG Service, 2004