In der vorliegenden Arbeit wurden Gewebeproben aus dem linken Ventrikel von Patienten mit terminaler Linksherzinsuffizienz infolge dilatativer Kardiomyopathie untersucht. Als Kontrollen dienten gesunde, nicht transplantierte Spenderherzen, sowie glattes Muskulaturgewebe aus der linken arteria thoracica interna. Ziel der Arbeit war es, mit Hilfe von molekularbiologischen Methoden wie PCR, Northern- und Western-Blot sowie der Immunhistochemie die Expression von verschiedene Isoformen des ubiquitär vorkommenden Proteins a-Aktinin in gesundem und an DCM erkranktemMyokard zu vergleichen.
Untersuchungen mit dem konfokalen Mikroskop in der Immunhistochemie zeigten bei den Patienten mit dilatativer Kardiomyopathie Akkumulationen des nicht sarkomerischen alpha-Aktinin-1 im sarkoplasmatischen Retikulum von Kardiomyocyten. Mit dem Western-Blot konnten wir die Resultate der immunhistologischen Untersuchungen lokal auf Proteinebene bestätigen. Sie zeigten, den Akkumulationen entsprechend, eine deutliche Überexpression der nicht sarkomerischen a-Aktinin-1 Isoform (AK: BM 75.2) in den Herzmuskelgeweben der an DCM erkrankten Patienten im Gegensatz zu denKontrollherzen. Auch die Kontrollen der glatten Muskulatur zeigten hier ein deutliches Signal, was für die Spezifität des Antikörpers spricht. Jedoch blieb eine entsprechende Bestätigung auf mRNA-Ebene, wie im Folgenden beschrieben, mit einer vergleichbaren Überexpression aus.
Ähnlich verhielt es sich bei a-Aktinin-4 im Western-Blot. Zwar waren dezente Signalunterschiede zwischen Patientengeweben und Kontrollen zu erkennen, welche aber nicht als signifikant einzustufen waren. Die glatten Muskulatur-Kontrollen zeigten kein Signal. Der sarkomerische Antikörper (EA-53) produzierte, mit Ausnahme der Kontrollen für glatteMuskulatur, in allen Herzgeweben ein deutliches Signal.
Zusammenfassend zeigte somit nur die nicht sarkomerische a-Aktinin-1 Isoform (AK: BM 75.2) ein unerwartetes aber spezifisches und richtungweisendes Signal als Hinweis eines defekten Proteinmetabolismus.
Unter den Northern-Blot-Analysen zeigten die cDNA Sonden für a-Aktinin-1 und 2 die erwarteten 3,5 kb großen isoformenspezifische Signale, die jedoch keine Differenzen zwischen Kontrollherzen und DCM-Patienten aufwiesen.a-Aktinin -3 und 4 konnten mit den cDNA Sonden als auch später mit den spezifischen Oligonukleotiden nicht detektiert werden.
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