Untersuchungen zur Lokalisation und Funktion von ZP-Proteinen im Marmoset Modell
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Zusammenfassung
Im Rahmen dieser Arbeit wurden de-novo-Syntheseorte der ZP-Proteine im Ovargewebe des Marmoset-Affen mittels RT-PCR bestimmt. Weiterhin konnte mit Hilfe von anti-ZP-Peptid Antikörpern ZPA- und ZPC-Protein immunhistologisch und immun-elektronenmikroskopisch im Marmoset-Ovar lokalisiert werden; ergänzend dazu wurden die den antigenen Determinanten entsprechenden ZP-Peptiddomänen funktionell auf deren Bedeutung für die Spermatozoen-Zona Pellucida Bindung hin überprüft. Immunhistochemische Untersuchungen zeigten, dass polyklonale Anti-ZP-Peptid-Antiseren, die gegen homologe Aminosäuresequenzen in verschiedenen Spezies gerichtet sind, sowohl ZPA- als auch ZPC-Protein im Marmoset Ovar detektierten. Immun-Transmissionselektronenmikroskopische Untersuchungen zeigten, dass das ZPA-Protein homogen innerhalb der Zona Pellucida verteilt war, während ZPC verstärkt im inneren Teil der Zona Pellucida zu finden war. Diese zweischichtige Anordnung von ZPC-Protein unterstützt die lichtmikroskopische Beobachtung, dass die Zona Pellucida des Marmoset-Affen bilamillär strukturiert ist. ZPA- und ZPC-Protein wurden auch im Ooplasma sowie in den umliegenden Kumuluszellen nachgewiesen. Auffällig war, dass die ZPA-Protein Immunreaktion innerhalb des Ooplasmas und in den umliegenden Follikelzellen im Vergleich zum ZPC-Protein deutlich stärker war. Dem Nachweis von ZP-Proteinen in Follikelzellen und den Hinweisen auf unterschiedliche ZP-Protein Verteilungsmuster in den Zellen des Marmoset Ovargewebes folgte die Beantwortung der Frage nach dem Syntheseort der ZP-Proteine. Mittels RT-PCR konnten in unterschiedlichen follikulären Entwicklungsstadien sowohl in Eizellen als auch in Follikelzellen die mRNA-Expressionen aller drei ZP-Protein kodierenden Gene nachgewiesen werden. Diese Ergebnisse unterstützen die Hypothese, dass im Marmoset-Ovar neben den Eizellen auch Follikelzellen ZP Proteine de novo synthetisieren. Zur Überprüfung der funktionellen Relevanz der in der Marmoset Zona Pellucida nachgewiesenen ZPA-Epitope wurde erstmals der Kompetitions-Hemizona-Assay eingesetzt. Hier zeigte sich, dass weder polyklonale Antiseren noch monoklonale Antikörper, die gegen die untersuchten ZP Proteindomänen gerichtet sind, die Spermatozoen-Zona Pellucida Interaktion bei Callithrix jacchus beeinflussen. Die im Rahmen der Dissertation erzielten Ergebnisse zur Lokalisation, Synthese und Funktion der ZP-Proteine im Marmoset-Ovar sind Grundlage für weitere Untersuchungen zur immun-kontrazeptiven Bedeutung von ZP-Proteinen und synthetischen ZP-Peptiden in Primaten.Verknüpfung zu Publikationen oder weiteren Datensätzen
Beschreibung
Anmerkungen
Erstpublikation in
Molecular Human Reproduction 2004; 10 (7): 481-488